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用氯仿异戊醇提取DNA的方法= 25241

发表于:2019-11-08 11:45 作者:admin 来源:admin

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1)将为1。
将5 ml培养物倒入微量离心管中,以12,000 g离心30秒,然后抽吸培养物以尽可能干燥细菌。以6000 rpm的速度去除上清液2分钟。该步骤是去除杂质,例如培养基和残留在细菌表面上的残留物,并使随后的反应干扰最小化。]2.将细菌沉淀物重悬于100μl冷冻溶液I中,并用无泡沫的喷枪充分混合。加冰5分钟;[在混合过程中避免气泡的方法是将黄色喷枪的压力从200 ul调整到约50 ul。太高是产生气体的主要原因。解决方案二:0
用2 mol / l NaOH + 1%SDS(当前可用)[200μl2 M NaOH + 200μl10%SDS = 2 ml溶液II]覆盖管,并迅速[尽快开始,但缓慢摇动]颠倒5次以混合内容物。将离心管放在冰上,不要摇晃。开始混合,并提高效果。]4.添加150μl预冷的Solution III冰,盖上试管,并轻轻颠倒试管10秒钟,以使Solution III均匀地扩散到粘性细菌裂解物中[[添加至参考文献II][实际上非常粘稠,通过将EP管旋转几次而混合,然后将管倒在3-5m冰上;以12000g离心5分钟,[最好离心10分钟]]将上清液转移到另一个离心管中[吸出黄色针头,慢慢吸,不要摇动下层][吸出上清液,然后离心5分钟,效果更好]微量离心2分钟,上清液在单独的离心管中;[添加和转移时要戴手套并戴上通风的厨房。枪被吹走,不会掉落,并且有苯酚气味。离心时氯仿很奇怪。
枪头又用了一个。
将5毫升EP管放入特殊的垃圾袋中,紧密合上垃圾袋,然后将其放入特殊的垃圾桶中。
]7.用2倍体积的乙醇沉淀双链DNA,混合并在4度下放置30分钟[可见的絮凝剂]8.在12000 g下离心5分钟,小心吸出上清液将试管放在纸巾上(或使用一次性吸头连接至真空管并轻轻抽水),然后除去试管壁上的液滴。是的(将核酸在空气中干燥10分钟);[首先使用蓝色枪,然后使用黄色枪,最后使用白色枪。
在低速行驶的情况下,它可以放置在超干净工作台的挡风玻璃的出风口处,并且吹气速度更快。
如果不能长时间干燥,则可以在50度烤箱中烘烤5分钟]9。
管壁和沉淀物用200ul乙醇洗涤,该乙醇用70%冰预冷。DNA不溶于70%乙醇。30%的水的目的是溶解盐并避免干扰随后的酶消化或其他操作。,但关系不是很大];以12000 rpm离心4度5分钟;使用黄色枪头吸出上清液,然后立即离心30秒,然后使用白色枪头使用剩余的溶液抽吸。存放在-20度或4度。
[加水之前,用纸擦干管壁上的干酒精。加水时,请注意不要喷洒未喷洒的乙醇。首先,将Rnase母液加到水中1000倍,并在37°下放置1小时以消化RNA]


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